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书书书中华人民共和国出入境检验检疫行业标准犛犖／犜２２０６．４—２００９化妆品微生物检验方法第４部分：链球菌犇犲狋犲狉犿犻狀犪狋犻狅狀狅犳犿犻犮狉狅犫犻狅犾狅犵犻犮犪犾犻狀犮狅狊犿犲狋犻犮狊—犘犪狉狋４：犛狋狉犲狆狋狅犮狅犮犮狌狊狊狆狆．２００９０２２０发布２００９０９０１实施中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局发布书书书前 言 ＳＮ／Ｔ２２０６《化妆品微生物检验方法》分为以下部分：———第１部分：沙门氏菌；———第２部分：需氧芽孢杆菌和蜡样芽孢杆菌；———第３部分：肺炎克雷伯氏菌；———第４部分：链球菌；———第５部分：肠球菌。本部分为ＳＮ／Ｔ２２０６的第４部分。本部分的附录Ａ是规范性附录。本部分由国家认证认可监督管理标准化委员会提出并归口。本部分由中华人民共和国新疆出入境检验检疫局、中华人民共和国广州出入境检验检疫局食品检测中心负责起草。本部分的起草人：黄玲、蒋刚强、许龙岩、刘小兰、窦辉。本部分系首次发布的出入境检验检疫行业标准。Ⅰ犛犖／犜２２０６．４—２００９化妆品微生物检验方法第４部分：链球菌１ 范围ＳＮ／Ｔ２２０６的本部分规定了化妆品中链球菌的检验方法。本部分适用于化妆品中链球菌的检验。２ 设备和材料２．１ 恒温培养箱：３６℃±１℃。２．２ 高压蒸气灭菌锅。２．３ 冰箱：０℃～４℃。２．４ 显微镜：１０×～１００×。２．５ 天平：最大称量达２０００ｇ，精确至０．１ｇ。２．６ 灭菌吸管：１ｍＬ（具０．０１ｍＬ刻度）、５ｍＬ（具０．１ｍＬ刻度）、１０ｍＬ（具０．１ｍＬ刻度）。２．７ 灭菌试管：１６ｍｍ×１６０ｍｍ、１８ｍｍ×１８０ｍｍ。２．８ 灭菌培养皿：直径９０ｍｍ。２．９ 灭菌三角瓶：内含玻璃珠。２．１０ ｐＨ计或ｐＨ试纸。２．１１ 酒精灯。２．１２ 灭菌剪子、镊子等。２．１３ 水浴箱。２．１４ 灭菌研钵及研棒。２．１５ 均质器。３ 培养基和试剂３．１ ＳＣＤＬＰ液体培养基：见附录Ａ中第Ａ．１章。３．２ 脑心浸出液培养基：见附录Ａ中第Ａ．２章。３．３ 血琼脂：见附录Ａ中第Ａ．３章。３．４ 无菌液体石蜡。３．５ 无菌吐温８０。４ 检验程序检验程序见图１。１犛犖／犜２２０６．４—２００９图１ 化妆品中链球菌的检验程序５ 操作步骤５．１ 增菌培养：取１∶１０稀释样品１０ｍＬ加入到９０ｍＬＳＣＤＬＰ液体培养基，置３６℃±１℃、培养２４ｈ。５．２ 分离培养：从培养液中挑取培养物，划线接种到血琼脂脑心浸液琼脂平板上，置３６℃±１℃培养２４ｈ。如有菌落生长，在血琼脂上链球菌菌落特征：呈灰白色，半透明或不透明，表面光滑，有乳光，菌落直径约０．５ｍｍ～２ｍｍ。在脑心浸液琼脂平板上，其菌落呈灰白色，半透明或不透明，表面光滑，有乳光，菌落直径约０．５ｍｍ～２ｍｍ。５．３ 染色镜检：挑取若干可疑的菌落，革兰氏染色，镜检呈现链状或双排列的革兰氏阳性球菌。５．４ 触酶实验：取一块洁净的白色滤纸片放在灭菌平皿内，用接种环挑取可疑菌落涂在滤纸片上，然后加一滴３％过氧化氢溶液，３０ｓ之内，出现气泡者为阳性，不发生气泡者为阴性。５．５ 万古霉素实验：挑取可疑的菌落接种于含有万古霉素（０．５μｇ／Ｌ～４．０μｇ／Ｌ）的脑心浸液琼脂培养基中，置３６℃±１℃培养１８ｈ～２４ｈ。观察细菌生长情况，链球菌均不能生长。６ 结果报告被检样品经增菌分离培养后，有可疑菌落生长，经证实为革兰氏阳性链状或双排列的球菌，触酶实验反应为阴性、对万古霉素敏感的细菌，即可报告被检样品中检出链球菌。２犛犖／犜２２０６．４—２００９附 录 犃（规范性附录）试剂和培养基犃．１ 犛犆犇犔犘液体培养基犃．１．１ 成分酪蛋白胨 １７．０ｇ大豆蛋白胨 ３．０ｇ氯化钠 ５．０ｇ磷酸氢二钾 ２．５ｇ葡萄糖 ２．５ｇ卵磷脂 １．０ｇ吐温８０ ７．０ｇ蒸馏水 １０００ｍＬ犃．１．２ 制法：将上述成分混合后，加热溶解，调ｐＨ为７．２～７．４分装于适合的容器中，１２１℃高压灭菌２０ｍｉｎ。注意振荡，使沉淀于底层的吐温８０充分混合，冷却至２５℃左右使用。犃．２ 脑心浸出液培养基犃．２．１ 成分蛋白胨 １０ｇ牛脑浸粉 １２．５ｇ葡萄糖 ２．０ｇ牛心浸粉 ５．０ｇ氯化钠 ５．０ｇ磷酸氢二钠 ２．５ｇ蒸馏水 １０００ｍＬ犃．２．２ 制法：将上述成分混合后，加热溶解，调ｐＨ为７．２～７．４分装，１２１℃高压灭菌２０ｍｉｎ冷却至２５℃左右使用。犃．３ 血琼脂犃．３．１ 成分豆粉琼脂（ｐＨ７．４～７．６） １００ｍＬ脱纤维羊血（或兔血）５ｍＬ～１０ｍＬ犃．３．２ 制法：加热溶化琼脂，冷到５０℃，以灭菌手续加入脱纤维羊血，摇匀，倾注平板。亦可分装灭菌试管，置成斜面。亦可用其他营养丰富的基础培养基配制血琼脂。注：豆粉琼脂组成：牛心消化汤（ｐＨ７．４～７．６）１０００ｍＬ琼脂２０ｇ黄豆粉浸液５０ｍＬ犛犖／犜２２０６．４—２００９书书书９００２—４．６０２２犜／犖犛中华人民共和国出入境检验检疫行 业 标 准化妆品微生物检验方法第４部分：链球菌ＳＮ／Ｔ２２０６．４—２００９中国标准出版社出版北京复兴门外三里河北街１６号邮政编码：１０００４５网址ｗｗｗ．ｓｐｃ．ｎｅｔ．ｃｎ电话：６８５２３９４６ ６８５１７５４８中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷开本８８０×１２３０１／１６ 印张０．５ 字数７千字２００９年５月第一版 ２００９年５月第一次印刷印数１—２０００书号：１５５０６６·２１９６４９ 定价１４．００元