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1微生物检验技术----传染病病原(细菌)---2013-5-8疾病病原菌传播培养基特异性检测其他，分型等鼠疫鼠疫耶尔森菌G-蚤胰酶消化肉胨琼脂郝氏琼脂HottingersF1抗原/抗体噬菌体裂解试验阳性，则鼠疫成立。致病决定gene在毒力岛上。霍乱O1/O139群霍乱弧菌G-粪-口碱性蛋白胨增菌液庆大霉素选择性平板TCBS培养基霍乱肠毒素ct(choleratoxin)O1抗原作血清拨片凝集试验分群，血清分型有小川型(A+B)，稻叶型(A+C)，彦岛型(A+B+C)产生分泌型IgA抗体，是否感染过用GM1-ELISA试验。(神经节苷脂)伤寒副伤寒伤寒/副伤寒沙门菌G-食物水-口SF增菌液，SS，麦康凯，DHL培养基，血平板O抗原H抗原(鞭毛)Vi抗原(毒力因子)1-2week采集血液，3-4week采集粪便。用肥达试验做鉴定。临床表现是不明原因持续发热。淋病淋病奈瑟双球菌G-巧克力琼脂平板T-M培养基似脑膜炎双球菌，中性粒细胞内发现G-双球菌，有诊断价值梅毒梅毒螺旋体(形似细密弹簧)G-不能在培养基上生长兔睾丸或者眼前房内梅毒螺旋体抗体(特异性)反应素抗体脂质(非特异性)非密螺旋体抗原试验：牛心肌的心脂质为反应物；VDLR颗粒/PRP颗粒+人血清凝集密螺旋体抗原试验：NicHols株螺旋体+患者血清(特异性抗体)证实，FTA-ABS白喉白喉棒状杆菌(放线菌)G+呼吸道飞沫吕氏血清斜面哥伦比亚血培养基亚硒酸钾培养基Tox+gene存在于B棒状杆菌噬菌体上，毒力所在。PCR：测Tox+geneElek平板试验：测Tox+protein含Tox+gene的溶源性白喉杆菌临床特征：候部有灰白色伪膜百日咳百日咳杆菌G-飞沫咳碟法，鼻咽拭子法含青霉素G的包-姜培养基PT(百日咳素)FHA(丝状血凝素)S-R相变异(smooth，rough)I相----ⅡⅢⅣ相流行性脑脊髓膜炎脑膜炎奈瑟双球菌G-取CSF脑脊液CAP，BAP(Chocolateagarplate,Bloodagarplate),Kovac氧化酶试验，10s内呈紫色，阳性荚膜多糖抗原，A+B+C型90%以上感染链球菌G+血平板上溶血а溶血：甲型溶血性链球菌：1—2mm溶血环，草绿色：致病力弱vs肺炎(链球)双球菌в溶血：乙型溶血性链球菌：2—4mm透明溶血环，灰白色：致病力强化脓性链球菌г溶血：丙型链球菌：无溶血环：不致病2浅表性感染，菌血症等化脓性链球菌G+根据多糖抗原，可分为A，B，C……20群TSA(胰酶消化大豆琼脂，Trypticsoyagar)THB肉汤增菌液血平板杆菌肽敏感试验：抑菌圈10mm，阳性，A群链球菌CAMP阳性试验：CAMP因子(协同溶血素蛋白)，加强金葡菌的溶血，形成半月形强溶血区，B群链球菌马尿酸钠水解试验：马尿酸水解酶+氯化铁恒定沉淀物，B群链球菌6.5%氯化钠生长试验：很强耐盐能力，D群链球菌大叶性肺炎肺炎链球菌(双球菌)G+血平板草绿色a溶血环肺炎链球菌vs甲型溶血性链球菌：①奥普托欣实验(optochin纸片)14mm生长抑制区，阳性。②胆汁溶菌试验(胆汁/胆盐可溶解肺炎链球菌)，加胆盐，细胞裂解。其致病力主要来自荚膜的抗吞噬作用，无荚膜则无毒力。钩体病钩端螺旋体G-Korthof/EMJH培养基1week取血液，2week后取中段尿暗视野显微镜观察钩体(活的，会动)全身感染性疾病，常自限性，问号钩体(致病性)莱姆病伯道疏螺旋体G-鼠-蜱BSK培养基暗视野显微镜观察钩体(活的，会动)WB作为IFA和ELISA检测真假阳性的确诊方法母畜流产布氏菌布氏琼脂布氏肉汤营养要求高初次培养需5%--10%的CO2其血液、羊水、奶水中均含有布氏菌羊、猪、猫……炭疽炭疽芽孢杆菌G+人畜共患普通培养基：灰白色，毛玻璃状，狮鬃样菌落血平板：无溶血环毒素和荚膜均由质粒(PXO1&PXO2)编码，致病必须两端齐平大杆菌青霉素敏感试验，串珠试验噬菌体裂解试验斑疹伤寒立克次体G-，专性细胞内寄生，Verocell，L929cell7日龄鸡胚，雄性豚鼠外斐试验：用变形杆菌O抗原测立克次体WHO金标法：IFA间接免疫荧光发，测血清抗体水平Gram不易着色肺结核结核杆菌G+肺结核影像接种卡介苗BCG结核菌素试验：迟发超敏反应分支杆菌属抗酸染色阳性，生长缓慢，需8day—8week麻风麻风分支杆菌体外培养尚未成功标本直接涂片镜检，抗酸染色，存在于细胞内空肠弯曲病空肠弯曲菌G-粪口传播粪便标本，改良Camp-BAP布氏培养基，血平板，Skirrow培养基氧化酶/过氧化氢酶试验阳性H2S+，马尿酸水解试验+42℃微需氧培养(85%N2+10%CO2+5%O2)布氏杆菌肉汤42℃生长，25℃不生长临床表现：腹泻发热，VS结肠弯曲菌胃炎幽门螺杆菌G-胃粘膜组织，布氏杆菌培养基，脑心浸液，血平板(要求高，同上微需氧)大量高活性尿素酶，尿素呼吸试验—14C呼气试验引起急慢性胃炎，消化性溃疡肺炎军团菌G-基础培养基：BCYE-a培养基bufferedcharcoal-yeastextract选择培养基：GVPC培养基，加抗生素嗜肺，引起肺炎首次发现：美国退伍军人协会的成员中爆发发热性呼吸道疾病3脑膜炎流感嗜血杆菌G-血平板(含有ⅤⅩ因子才能生长)继发于流感之后，引起脑膜炎，寄生于人体鼻咽部。和金葡菌形成卫星现象。肺炎克雷伯杆菌G-血平板，麦康凯平板用胰酶消化使痰液匀质化O抗原，K抗原(分型)荚膜肿胀试验分型，多属3和12型又称肺炎杆菌沙眼泌尿道呼吸道感染衣原体G-有细胞壁、独特发育周期、通过细胞滤器、严格细胞内寄生(McCoy细胞培养)的原核细胞性微生物。原体：原生小体，elementarybody，有感染力，感染阶段始体：网状小题，initialbody，无感染力，繁殖阶段(有丝分裂)有鹦鹉热衣原体、沙眼衣原体、肺炎衣原体肺炎尿道炎宫颈炎支原体G-培养：需丰富的胆固醇、尿素、血清蛋白等无细胞壁，目前所知最小的独立生存的、自行繁殖的微生物。固体培养基上形成油煎蛋样菌落。有肺炎支原体、解脲支原体、生殖支原体、人型支原体等肺炎链球菌与甲型溶血性链球菌在血平板上均呈现a溶血，草绿色溶血环。区别方式：奥普托欣试验和胆汁溶菌试验，前者均阳性。1、奥普托欣试验：CO2孵育箱血平板BAP奥普托欣纸片14mm生长抑制区域，+9—13mm区域，做胆汁溶菌试验2、胆汁溶菌试验：胆盐能活化肺炎链球菌的自溶酶，引起细菌溶解。A:试管法0.25ml细菌悬液+0.25ml脱氧胆酸（胆盐）37度，2h细胞裂解，管液变澄清，阳性B：平板法。平板+胆盐35度，15h----菌落消失或成扁平状。4微生物检验技术----传染病病原(病毒)----2013-5-8疾病病毒遗传物质传播途径培养细胞、检测方法等甲型肝炎甲型肝炎病毒HAV正链小RNA粪-口HAV-IgM阳性，HAV-IgG呈4倍以上升高，ALT升高，尿胆红素+，乏力，黄疸乙型肝炎乙型肝炎病毒HBV不完全双链环状DNA血液、性接触、母婴小球形外膜颗粒，管型颗粒(无感染性，22nm)，Dane颗粒(有感染性，42nm)丙型肝炎丙型肝炎病毒HCVRNA血液、性接触、母婴症状与乙肝类似，更轻一些丁型肝炎丁型肝炎病毒HDVRNA血液、性接触、母婴缺陷病毒，HDV+HBV才复制，外包裹HBsAg戊型肝炎戊型肝炎病毒HEVRNA粪-口(水源污染)艾滋病(AIDS)人类免疫缺陷病毒(HIV)RNA，逆转录病毒血液、性接触、母婴病原分离在BSL-3进行，生物安全柜内。分HIV-1(95%)和HIV-2两型。抗原检测：P24，缩短窗口期。核酸：辅助诊断。常规方法：抗体检测HIV-1和HIV-2抗体：抗体筛查试验：ELISA，确诊：WB脊髓灰质炎(小儿麻痹症)脊髓灰质炎病毒，属肠道病毒RNA不宜用冷冻干燥法保存粪-口在麻痹14day内采集2分粪便标本。细胞：人横纹肌肉瘤细胞RDcell，转人脊灰病毒受体小鼠肺细胞L20B最主要抗原：vp1，virusprotein1ELISA中和抗体试验，仅作流行调查，1：100麻疹麻疹病毒RNA，单股负链咽拭子细胞：Vero(非洲绿猴肾细胞)，首选Vero-SLEM刺突上有血凝素HA(凝血)和血溶素HL(溶血，融合成多核细胞)Ig-M:ELISA,7-10D峰值，IgG：4week峰值流行性出血热，肾综合征出血热汉坦病毒RNA，负链分节段鼠类-自然宿主，传染源细胞：Vero-E6，A549,2BS，RL出血+发热+肾损伤(HFRS，hemorrhagicfeverrenalsyndrome)抗体：急性期比恢复期有4倍以上升高IgG埃博拉出血热(ebHF)埃博拉病毒RNA，单股负链Cell：Verocellor豚鼠腹腔BSL-4实验室分离流行性乙型脑炎(日本乙型脑炎)乙脑病毒RNA，黄病毒科猪-贮存宿主，三带喙库蚊-传播媒介细胞：BHKcell，C6/36cell特征基因：Prm型别鉴定，Egene毒力鉴定Prm：膜蛋白M的前体premembrane登革热(登革出血热)登革病毒RNA，黄病毒科，正链伊蚊流行最广的虫媒传染病，细胞：C6/36cell克里米亚-刚果出血热CCHFVRNA，SW-13cell适合做空斑试验又称克里米亚出血热，新疆出血热5流行性感冒流感病毒根据核蛋白NP&膜蛋白MP分为甲乙丙三型RNA，分节段，单股负链甲型流感病毒：很容易突变，H16N9，引起世界性大流行，动物、人大量分布乙型流感病毒：引起局部暴发，仅感染人丙型流感病毒：散在出现，侵袭婴幼儿病毒分离是诊断金标准，细胞：MDCK狗肾传代细胞，9-11D鸡胚检测抗原：NP，HA(血凝素)，NA(神经氨酸酶)。狂犬病(恐水症)狂犬病毒RNA，单股负链，弹簧病毒科细胞：鼠神经传代细胞，Verocell，BHK21cell，乳小白鼠接种抗体检测对临床意义不大，中和抗体水平0.5IU/ml。传统小鼠中和试验orWHO推荐的快速荧光灶抑制试验(50%抑制率)破损皮肤黏膜后感染中枢神经系统，早期不进入血液，晚期血脑屏障破坏后大量进入血液产生抗体流行性腮腺炎腮腺炎病毒RNA，不分节段负链培养细胞：VerocellMuV引起腮腺炎肿胀急性出血性结膜炎(红眼病)肠道病毒70&柯萨奇病毒A24RNA，单股正链传染性极强的急性病毒性眼病，2week自限性疾病，引起结膜红肿(enterrovirus70&CoxsackieA24)VP1gene用RT-PCR确诊，发病1-3D内结膜标本，多种细胞可培养风疹风疹病毒RNA，正链人是唯一自然宿主Cell：绿猴肾细胞Verocell，兔肾细胞RK13，地鼠肾BHK-21出疹时已有IgM抗体，妊娠妇女排除风疹测定IgG。垂直感染，孕妇早期初次感染容易造成流产、死胎、畸胎。病毒性胃肠炎，自限性急性感染性腹泻轮状病毒RNA，双链粪口传播，采用腹泻早期粪便标本细胞：MA-104，猴胚肾细胞A组(6月-2岁)，B组(青壮年)，C组(散发儿童腹泻)杯状病毒RNA，单股正链肠道腺病毒双链线性DNA星状病毒RNA，单股正链肠道病毒RNA包括埃可病毒，柯萨奇病毒森林脑炎森林脑炎病毒RNA。单股正链蜱BSL-4级实验室分离，侵犯中枢神经系统，取血液、脑干组织分离标本。IgM1week达高峰。Cell：Verocell，BHK-2，鸡胚、小白鼠易感。手足口病柯萨奇A组16病毒(CoxA16)肠道病毒71(EV71)小RNA，单股正链呼吸、密切接触handfootandmouthdisease表现：发热、手足口腔等部位的皮疹、溃疡。5岁婴儿多发。标本：粪便、咽拭子、CSF。Cell：人肺系细胞MRC-5Gene：VP1(virusprotein)，UTR的poly(A)尾巴，untranslationregion。水痘-带状疱疹水痘-带状疱疹病毒(VZV)线性双链DNA病人为唯一传染源标本：鼻咽分泌物，疱疹液。细胞：人胚纤维母细胞。原发水痘，潜伏于神经元内，继发带状疱疹。孕妇患水痘可引起胎儿畸形、流产甚至死亡。与单纯疱疹相似。6尖锐湿疣，性病疣