国家生化工程技术研究中心（北京）

国家生化工程技术研究中心（北京）地址：北京市海淀区中关村北二条1号中国科学院过程工程研究所西区电话/传真：010-62550875邮编：100190网址：邮箱：hhqu@home.ipe.ac.cn琼脂糖亲和介质（蓝胶）产品说明书1.产品简介琼脂糖亲和介质（蓝胶）广泛用于白蛋白、干扰素、脂蛋白、凝血因子和激酶、脱氢酶等需要NAD+和NADH+辅助因子的酶的分离纯化。本中心开发的蓝胶以琼脂糖凝胶为基质，以普施安蓝（ProcionblueMX-R）为配基，该亲和介质具有良好的色谱性能，在推荐洗脱条件下具有较强的物理化学稳定性，配基不易脱落，寿命长。2.产品特性参数指标基质6%交联琼脂糖凝胶配基ProcionblueMX-R形状球形介质平均粒径90μm(45-165)配基密度30-40µmolProcionblueMX-R/mlwetgel动态载量8mg溶菌酶/mlwetgel最高流速（25℃）500cm/h最高耐压0.3MPa(3bar)pH稳定性4~12（长时间）；3~13（短时间）保存4~8oC（20%乙醇）3.应用蓝胶的层析操作通常包括装柱、平衡、进料、淋洗、洗脱、再生等步骤。平衡：用5~10CV的平衡缓冲液（20mMPB，pH7.0）平衡层析柱，至流出液电导和pH不变（与平衡液一致）。NationalEngineeringResearchCenterforBiotechnology(Beijing)Add：No.1Beiertiao,Zhongguancun,HaidianDistrict,Beijing,ChinaTel/Fax：010-62550875Postcode：100190Web：：hhqu@home.ipe.ac.cn进料：样品缓冲液应尽可能与平衡液一致。固体样品可用平衡液溶解配制；低浓度样品溶液可用平衡液透析；高浓度样品溶液可用平衡液稀释。为了避免堵塞层析柱，样品应经离心或微滤（0.45μm）处理。进料量根据介质的载量和料液中目标蛋白的含量计算。淋洗：上样完毕后继续用平衡缓冲液淋洗至基线。洗脱：用洗脱缓冲液（20mMPB+1MMgCl2(或KCl)，pH7.0）洗脱，收集流出液。再生、原位清洗：介质使用数次（5-10次，具体次数与原料的种类和来源及实验要求有关）后，需要对介质进行再生、原位清洗。（1）用0.1M的NaOH以40cm/h的速度清洗柱子3-5CV，然后用20%的乙醇清洗3CV，缓冲液洗到中性即可重复使用；（2）对疏水性结合的蛋白、脂蛋白和脂类物质，可用3~4CV的70%乙醇或30%异丙醇清洗，并用3~10CV的纯水冲洗。其它注意事项：在装柱、使用和保存柱子的时候，要避免柱子流干而导致气泡进入；第1次使用时先用2MNaCl冲洗5CV，洗去残留的染料，平衡后即可使用。4.其他服务（1）提供介质筛选及工艺开发的咨询。（2）接受客户委托开发各种分离介质和分离工艺。（3）按客户要求提供各种介质及相应规格的预装柱。（4）为客户提供专业的售前和售后服务。国家生化工程技术研究中心（北京）地址：北京市海淀区中关村北二条1号中国科学院过程工程研究所西区电话/传真：010-62550875邮编：100190网址：邮箱：hhqu@home.ipe.ac.cn琼脂糖亲和介质（谷胱甘肽）产品说明书1.产品简介琼脂糖亲和介质（谷胱甘肽）是专门设计用于分离纯化不同来源（如胎盘、肝脏、胞液、大片吸虫、昆虫、血吸虫、玉米螟等）的谷胱甘肽S-转移酶、谷胱甘肽S-转移酶的重组融合蛋白和依赖S-转移酶或谷胱甘肽的蛋白，一步分离即可得到高纯度的目标蛋白，操作条件温和，有利于保持蛋白活性。本中心开发的谷胱甘肽亲和介质以琼脂糖凝胶为基质，以谷胱甘肽为配基，具有良好的色谱性能，并具有较强的化学和物理稳定性。2.产品特性参数指标基质4%交联琼脂糖凝胶配基谷胱甘肽形状球形介质平均粒径90μm(45~165)配基密度20~30GSH/mlwetgel动态载量10mgGST/mlwetgel最高流速（25℃）450cm/h最高耐压0.3MPa(3bar)pH稳定性3~12（长时间）；2~12（短时间）化学稳定性30%异丙醇、6M盐酸胍、8M尿素物理稳定性溶液的pH或离子强度影响介质的体积变化率2%保存4~8oC（20%乙醇）3.应用谷胱甘肽亲和介质的层析操作通常包括装柱、平衡、进料、淋洗、洗脱、再生等步骤。平衡：用5~10CV的平衡缓冲液（50mMTris-HCl，pH8.0，可添加适当浓NationalEngineeringResearchCenterforBiotechnology(Beijing)Add：No.1Beiertiao,Zhongguancun,HaidianDistrict,Beijing,ChinaTel/Fax：010-62550875Postcode：100190Web：：hhqu@home.ipe.ac.cn度（如0.15M）的NaCl抑制非特异性吸附）平衡层析柱，至流出液电导和pH不变（与平衡液一致）。进料：样品缓冲液应尽可能与平衡液一致。固体样品可用平衡液溶解配制；低浓度样品溶液可用平衡液透析；高浓度样品溶液可用平衡液稀释。为了避免堵塞层析柱，样品应经离心或微滤（0.45μm）处理。进料量根据介质的载量和料液中目标蛋白的含量计算。淋洗：上样完毕后继续用平衡缓冲液淋洗至基线。洗脱：用洗脱缓冲液（50mMTris-HCl+10mMGSH，pH8.0，GSH浓度需要根据目标蛋白的结合力进行适当调整）洗脱，收集流出液。原位清洗：介质使用数次（具体次数与原料的种类和来源及实验要求有关）后，需要对介质进行在位清洗。（1）最常用的方法是用0.5M的NaOH以100cm/h的速度淋洗柱子3-5CV，然后用缓冲液洗到中性即可重复使用；（2）对疏水性结合的蛋白、脂蛋白和脂类物质，可用5~10CV的70%乙醇或30%异丙醇清洗（20min以上），并用3~10CV的纯水冲洗。其它注意事项：在装柱、使用和保存柱子的时候，要避免柱子流干而导致气泡进入。4.其他服务（1）提供介质筛选及工艺开发的咨询。（2）接受客户委托开发各种分离介质和分离工艺。（3）按客户要求提供各种介质及相应规格的预装柱。（4）为客户提供专业的售前和售后服务。国家生化工程技术研究中心（北京）地址：北京市海淀区中关村北二条1号中国科学院过程工程研究所西区电话/传真：010-62550875邮编：100190网址：邮箱：hhqu@home.ipe.ac.cn琼脂糖亲和介质（肝素）产品说明书1.产品简介肝素（Heparin）是一种含硫酸酯的酸性多糖，能和抗凝血因子III、凝血酶、类凝血酶、人凝血因子IX、XI和VIII，也能和大肠杆菌表达的人白介素、人前列腺生长因子、重组人血管内皮生长因子、软骨生长因子、碱性成纤维细胞生长因子、重组人酸性成纤维细胞生长因子、重组肝细胞生长因子、重组鼠肝素辅因子II、重组人血小板第四因子、重组人内皮抑素、重组人角质细胞生长因子等生物大分子结合，所以肝素亲和介质可以用于这类物质的纯化。本中心开发的琼脂糖亲和介质（肝素）以交联琼脂糖为基质，将肝素偶联到琼脂糖凝胶上，该介质具有良好的色谱性能，并具有较强的的物理化学稳定性，配基不易脱落，使用寿命长，使用方便。2.产品特性参数指标基质6%交联琼脂糖凝胶配基Heparin形状球形介质平均粒径90μm(45~165)配基密度5mgheparin/mlwetgel动态载量2mgATIII/mlwetgel最高流速（25℃）500cm/h最高耐压0.3MPa(3bar)pH稳定性4~12（长时间）；4~13（短时间）保存4~8oC（0.05M乙酸钠+20%乙醇）3.应用肝素亲和介质的层析操作通常包括装柱、平衡、进料、淋洗、洗脱、再生等步骤。平衡：用5~10CV的平衡缓冲液（20-50mMPB或Tris/HCl，pH7.4-8.0，可NationalEngineeringResearchCenterforBiotechnology(Beijing)Add：No.1Beiertiao,Zhongguancun,HaidianDistrict,Beijing,ChinaTel/Fax：010-62550875Postcode：100190Web：：hhqu@home.ipe.ac.cn加入0.15MNaCl抑制非特异吸附）平衡层析柱，至流出液电导和pH不变（与平衡液一致）。进料：样品缓冲液应尽可能与平衡液一致。固体样品可用平衡液溶解配制；低浓度样品溶液可用平衡液透析；高浓度样品溶液可用平衡液稀释。为了避免堵塞层析柱，样品应经离心或微滤处理。进料量根据介质的载量和料液中目标蛋白的含量计算。淋洗：上样完毕后继续用平衡缓冲液淋洗至基线。洗脱：用洗脱缓冲液（20-50mMPB或Tris/HCl+1-2MNaCl，pH7.4-8.0，NaCl浓度需要根据目标蛋白的结合力进行适当调整）洗脱，收集流出液。可采用线性梯度或阶越式梯度洗脱。原位清洗：为了避免不同样品间的相互干扰，或者当介质污染比较严重时（反压增加），需要对介质进行在位清洗。（1）对于以离子键结合的蛋白，可用2~3CV以上的2MNaCl清洗，并用3CV以上的纯水冲洗。（2）对沉淀或变性蛋白蛋白，可用0.1MNaOH清洗（1~2h），并用3~10CV平衡液和3CV以上的纯水冲洗。也可用6MGua-HCl或8Murea清洗（0.5~1h）（3）对疏水性结合的蛋白，可用0.1~0.5%的非离子去污剂清洗（1~2h），并用3~10CV的纯水冲洗。其它注意事项：在装柱、使用和保存柱子的时候，要避免柱子流干而导致气泡进入。国家生化工程技术研究中心（北京）地址：北京市海淀区中关村北二条1号中国科学院过程工程研究所西区电话/传真：010-62550875邮编：100190网址：邮箱：hhqu@home.ipe.ac.cn琼脂糖亲和介质（Ni）产品说明书1.产品简介琼脂糖亲和介质（Ni）属于一类金属螯合介质，它是将亚氨基二乙酸（IDA）键合在高流速琼脂糖微球上，并螯合金属离子Ni2+而形成的一种亲和层析介质。该亲和介质不仅具有吸附容量大、选择性好、通过性强、易于再生、成本低等优点，还有利于保持产品的生物活性和提高产品的收率，从而广泛用于生物制药和生物工程下游蛋白质、核酸及多肽的分离纯化，尤其是组氨酸标记蛋白质的高效制备。2.产品特性参数指标基质4%交联琼脂糖凝胶配基-N(CH2COOH)2(IDA)形状球形介质平均粒径90μm(45~165)金属离子载量40μmolNi2+/ml(根据需要可在10-120μmol之间调节)动态载量20~30mgLDH/mlwetgel最高流速（25℃）500cm/h最高耐压0.3MPa(3bar)pH稳定性3~13（长时间）；2~14（短时间）保存4~8oC（20%乙醇）3.应用采用琼脂糖亲和介质（Ni）对组氨酸标记蛋白质进行分离纯化的过程通常包括装柱、平衡、进料、淋洗、洗脱、再生等步骤。平衡：用5~10CV的平衡缓冲液平衡层析柱，至流出液电导和pH不变（与平衡液一致）。实际操作中，一般选用中性/弱碱性（pH7~8）的高盐（0.15~1.0MNaCl或其它中性盐）缓冲液。其中常用磷酸盐缓冲体系，如20mMPB+0.5MNaCl,pH7.4。对于结合力较强的带组氨酸标记的蛋白质，平衡缓冲液中可加入低浓度（20~40mM）的咪唑。进料：样品缓冲液应尽可能与平衡液一致。固体样品可用平衡液溶解配制；低浓度样品溶液可用平衡液透析；高浓度样品溶液可用平衡液稀释。为了避免堵塞层析柱，样品应经离心或微滤处理。进料量根据介质的载量和料液中目标蛋白NationalEngineeringResearchCent